Ташаккур барои боздид аз Nature.com. Версияи браузере, ки шумо истифода мебаред, дастгирии маҳдуди CSS дорад. Барои натиҷаҳои беҳтарин, мо тавсия медиҳем, ки версияи нави браузери худро истифода баред (ё режими мутобиқатро дар Internet Explorer хомӯш кунед). Дар айни замон, барои таъмини дастгирии доимӣ, мо сайтро бе услубсозӣ ё JavaScript нишон медиҳем.
Ифлосшавии кадмий (Cd) барои бехатарии парвариши растании шифобахши Panax notoginseng дар Юннан таҳдиди эҳтимолӣ эҷод мекунад. Дар зери стресси экзогении Cd, таҷрибаҳои саҳроӣ барои фаҳмидани таъсири истифодаи оҳак (0, 750, 2250 ва 3750 кг/соат/м2) ва пошидани баргҳо бо кислотаи оксалат (0, 0.1 ва 0.2 мол/л) ба ҷамъшавии Cd ва антиоксидант гузаронида шуданд. Компонентҳои системавӣ ва шифобахши Panax notoginseng. Натиҷаҳо нишон доданд, ки дар зери стресси Cd, пошидани оҳак ва баргҳо бо кислотаи оксалат метавонад миқдори Ca2+-и Panax notoginseng-ро зиёд кунад ва заҳролудии Cd2+-ро кам кунад. Илова кардани оҳак ва кислотаи оксалат фаъолияти ферментҳои антиоксидантро афзоиш дод ва мубодилаи моддаҳои танзимгарони осмотикиро тағйир дод. Муҳимтаринаш афзоиши фаъолияти CAT 2.77 маротиба мебошад. Дар зери таъсири кислотаи оксалат, фаъолияти SOD то 1.78 маротиба афзоиш ёфт. Миқдори MDA 58.38% коҳиш ёфт. Ҳамбастагии хеле назаррас бо шакари ҳалшаванда, аминокислотаҳои озод, пролин ва сафедаи ҳалшаванда вуҷуд дорад. Оҳак ва кислотаи оксалат метавонанд миқдори ионҳои калсий (Ca2+)-и Panax notoginseng-ро зиёд кунанд, миқдори Cd-ро кам кунанд, муқовимати стрессии Panax notoginseng-ро беҳтар созанд ва истеҳсоли умумии сапонинҳо ва флавоноидҳоро афзоиш диҳанд. Миқдори Cd пасттарин аст, 68.57% камтар аз назорат аст ва ба арзиши стандартӣ (Cd≤0.5 мг кг-1, GB/T 19086-2008) мувофиқат мекунад. Таносуби SPN 7.73% буд, ки дар байни ҳамаи табобатҳо ба сатҳи баландтарин расид ва миқдори флавоноидҳо 21.74% ба таври назаррас афзоиш ёфт ва ба арзишҳои тиббии стандартӣ ва ҳосили оптималӣ расид.
Кадмий (Cd) як ифлоскунандаи маъмули хокҳои киштшуда аст, ба осонӣ кӯчида мешавад ва заҳролудии биологии назаррас дорад. Эл-Шафей ва ҳамкорон2 гузориш доданд, ки заҳролудии кадмий ба сифат ва ҳосилнокии растаниҳои истифодашуда таъсир мерасонад. Сатҳи аз ҳад зиёди кадмий дар хокҳои киштшуда дар ҷанубу ғарби Чин дар солҳои охир ҷиддӣ шудааст. Вилояти Юньнан салтанати гуногунии биологии Чин аст, ки намудҳои растаниҳои шифобахш дар кишвар дар ҷои аввал меистанд. Аммо, вилояти Юньнан аз захираҳои маъданӣ бой аст ва раванди истихроҷ ногузир ба ифлосшавии металлҳои вазнин дар хок оварда мерасонад, ки ба истеҳсоли растаниҳои шифобахши маҳаллӣ таъсир мерасонад.
Panax notoginseng (Burkill) Chen3) як гиёҳи шифобахши бисёрсолаи гиёҳии хеле арзишманд аст, ки ба ҷинси Panax аз оилаи Araliaceae тааллуқ дорад. Panax notoginseng гардиши хунро беҳтар мекунад, рукуди хунро бартараф мекунад ва дардро рафъ мекунад. Минтақаи асосии истеҳсолӣ префектураи Веншан, вилояти Юннан мебошад5. Зиёда аз 75% хок дар минтақаҳои маҳаллии парвариши женьшени Panax notoginseng бо кадмий олуда шудааст, ки сатҳи он дар минтақаҳои гуногун аз 81% то зиёда аз 100% фарқ мекунад6. Таъсири заҳролудии Cd инчунин истеҳсоли ҷузъҳои шифобахши Panax notoginseng, махсусан сапонинҳо ва флавоноидҳоро ба таври назаррас коҳиш медиҳад. Сапонинҳо як навъи пайвастагии гликозидӣ мебошанд, ки агликонҳои онҳо тритерпеноидҳо ё спиростанҳо мебошанд. Онҳо компонентҳои асосии фаъоли бисёр доруҳои анъанавии чинӣ мебошанд ва дорои сапонинҳо мебошанд. Баъзе сапонинҳо инчунин фаъолияти зиддибактериявӣ ё фаъолиятҳои арзишманди биологӣ, аз қабили таъсири табшикан, оромбахш ва зидди саратон доранд7. Флавоноидҳо одатан ба як қатор пайвастагиҳо ишора мекунанд, ки дар онҳо ду ҳалқаи бензол бо гурӯҳҳои феноликии гидроксил тавассути се атоми карбони марказӣ пайваст шудаанд. Ядрои асосӣ 2-фенилхроманон 8 мебошад. Он як антиоксиданти қавӣ аст, ки метавонад радикалҳои озоди оксигенро дар растаниҳо самаранок тоза кунад. Он инчунин метавонад воридшавии ферментҳои биологии илтиҳобиро боздорад, шифо ёфтани захмҳо ва рафъи дардро афзоиш диҳад ва сатҳи холестеринро паст кунад. Он яке аз компонентҳои асосии фаъоли Panax notoginseng мебошад. Зарурати фаврӣ барои ҳалли мушкилоти ифлосшавии кадмий дар хокҳо дар минтақаҳои истеҳсоли Panax ginseng ва таъмини истеҳсоли компонентҳои муҳими шифобахши он вуҷуд дорад.
Оҳак яке аз пассиваторҳои васеъ истифодашаванда барои тозакунии статсионарии хок аз олудашавии кадмий мебошад10. Он ба адсорбсия ва ҷойгиршавии Cd дар хок тавассути кам кардани биодастрасии Cd дар хок тавассути афзоиши арзиши рН ва тағир додани қобилияти мубодилаи катионии хок (CEC), сершавии намаки хок (BS) ва потенсиали оксиду барқароршавии хок (Eh)3,11 таъсир мерасонад. Илова бар ин, , оҳак миқдори зиёди Ca2+ -ро таъмин мекунад, бо Cd2+ антагонизми иониро ба вуҷуд меорад, барои ҷойҳои адсорбсия дар решаҳо рақобат мекунад, интиқоли Cd-ро ба хок пешгирӣ мекунад ва заҳролудии биологии паст дорад. Вақте ки 50 ммоль L-1 Ca таҳти стресси Cd илова карда шуд, интиқоли Cd дар баргҳои кунҷит боздошта шуд ва ҷамъшавии Cd 80% кам шуд. Як қатор таҳқиқоти монанд дар биринҷ (Oryza sativa L.) ва дигар зироатҳо гузориш дода шудаанд12,13.
Пошидани баргҳои зироатҳо барои назорат кардани ҷамъшавии металлҳои вазнин усули нави назорат кардани металлҳои вазнин дар солҳои охир мебошад. Принсипи он асосан бо реаксияи хелатсия дар ҳуҷайраҳои растанӣ алоқаманд аст, ки боиси ҷамъшавии металлҳои вазнин дар девори ҳуҷайра мегардад ва азхудкунии металлҳои вазнинро аз ҷониби растаниҳо бозмедорад14,15. Ҳамчун агенти хелатии устувори диаксидӣ, кислотаи оксалатӣ метавонад ионҳои металлҳои вазнинро дар растаниҳо мустақиман хелатсия кунад ва бо ин васила заҳролудиро коҳиш диҳад. Тадқиқотҳо нишон доданд, ки кислотаи оксалатӣ дар лӯбиёи лубиёӣ метавонад Cd2+ хелатсия кунад ва кристаллҳои дорои Cd-ро тавассути ҳуҷайраҳои трихомаи болоӣ раҳо кунад ва сатҳи Cd2+-ро дар бадан коҳиш диҳад16. Кислотаи оксалатӣ метавонад рН-и хокро танзим кунад, фаъолияти супероксиддисмутаза (SOD), пероксидаза (POD) ва каталаза (CAT)-ро афзоиш диҳад ва воридшавии шакари ҳалшаванда, сафедаи ҳалшаванда, аминокислотаҳои озод ва пролинро танзим кунад. Танзимгарони мубодилаи моддаҳо17,18. Кислота ва Ca2+-и зиёдатӣ дар растанӣ зери таъсири сафедаҳои ядрокунанда таҳшиншавии оксалати калсийро ташкил медиҳанд. Танзими консентратсияи Ca2+ дар растаниҳо метавонад ба таври муассир танзими кислотаи оксалат ва Ca2+-и ҳалшударо дар растаниҳо таъмин кунад ва аз ҷамъшавии аз ҳад зиёди кислотаи оксалат ва Ca2+19,20 пешгирӣ кунад.
Миқдори оҳаки истифодашуда яке аз омилҳои калидӣ мебошад, ки ба таъсири таъмир таъсир мерасонад. Муайян карда шуд, ки миқдори оҳак аз 750 то 6000 кг/м2 буд. Барои хокҳои турш бо рН 5.0~5.5, таъсири истифодаи оҳак дар миқдори 3000~6000 кг/соат/м2 нисбат ба миқдори 750 кг/соат/м221 ба таври назаррас баландтар аст. Аммо, истифодаи аз ҳад зиёди оҳак ба хок баъзе таъсири манфӣ мерасонад, ба монанди тағироти назаррас дар рН-и хок ва зичии хок22. Аз ин рӯ, мо сатҳи коркарди CaO-ро ҳамчун 0, 750, 2250 ва 3750 кг ҳм-2 муайян кардем. Вақте ки кислотаи оксалат ба Arabidopsis thaliana истифода шуд, маълум шуд, ки Ca2+ дар консентратсияи 10 ммоль L-1 ба таври назаррас коҳиш ёфтааст ва оилаи генҳои CRT, ки ба сигнализатсияи Ca2+ таъсир мерасонанд, ба таври қавӣ вокуниш нишон доданд20. Ҷамъоварии баъзе таҳқиқоти қаблӣ ба мо имкон дод, ки консентратсияи ин санҷишро муайян кунем ва таъсири таъсири иловаҳои экзогениро ба Ca2+ ва Cd2+23,24,25 минбаъд омӯзем. Аз ин рӯ, ин таҳқиқот ҳадафи омӯхтани механизми танзимкунандаи пошидани барги оҳак ва кислотаи оксалат ба миқдори Cd ва таҳаммулпазирии стресси Panax notoginseng дар хоки олуда бо Cd ва минбаъд омӯхтани роҳҳои беҳтари таъмини сифат ва самаранокии доруворӣ мебошад. Истеҳсоли Panax notoginseng. Ӯ роҳнамоии арзишмандеро дар бораи афзоиши миқёси парвариши растаниҳои алафӣ дар хокҳои олуда бо кадмий ва ба даст овардани истеҳсоли баландсифат ва устувор, ки бозори дорусозӣ талаб мекунад, пешниҳод мекунад.
Бо истифода аз навъи маҳаллии женьшеньи Веншан Панакс нотогинсенг ҳамчун мавод, таҷрибаи саҳроӣ дар Ланнижай, округи Цюбей, префектураи Веншан, вилояти Юннан (24°11′N, 104°3′E, баландии 1446 м) гузаронида шуд. Ҳарорати миёнаи солона 17°C ва боришоти миёнаи солона 1250 мм аст. Арзишҳои заминавии хоки омӯхташуда TN 0.57 г кг-1, TP 1.64 г кг-1, TC 16.31 г кг-1, OM 31.86 г кг-1, N-и гидролизи ишқорӣ 88.82 мг кг-1, бе фосфор 18.55 мг кг-1, калийи озод 100.37 мг кг-1, кадмийи умумӣ 0.3 мг кг-1, рН 5.4 буданд.
10 декабри соли 2017, 6 мг/кг Cd2+ (CdCl2·2.5H2O) ва коркарди оҳак (0, 750, 2250 ва 3750 кг/соат/м2) омехта карда, дар қабати 0~10 см дар ҳар як қитъа ба сатҳи хок пошида шуданд. Ҳар як коркард 3 маротиба такрор карда шуд. Қитъаҳои озмоишӣ ба таври тасодуфӣ ҷойгир карда шудаанд, ки ҳар як қитъа масоҳати 3 м2-ро фаро мегирад. Ниҳолҳои яксолаи Panax notoginseng пас аз 15 рӯзи коркарди замин кӯчонида шуданд. Ҳангоми истифодаи тӯри офтобгирӣ, шиддати рӯшноии Panax notoginseng дар дохили тӯри офтобгирӣ тақрибан 18% шиддати муқаррарии рӯшноии табииро ташкил медиҳад. Парвариш мувофиқи усулҳои анъанавии маҳаллии парвариш анҷом дода мешавад. Пеш аз марҳилаи пухта расидани Panax notoginseng дар соли 2019, кислотаи оксалатро дар шакли оксалати натрий пошед. Консентратсияи кислотаи оксалат мутаносибан 0, 0,1 ва 0,2 мол L-1 буд ва NaOH барои танзими рН ба 5,16 барои тақлид кардани рН миёнаи маҳлули шусташавии партов истифода шуд. Сатҳҳои болоӣ ва поёнии баргҳоро ҳафтае як маротиба соати 8:00-и субҳ пошед. Пас аз пошидани 4 маротиба дар ҳафтаи 5-ум, растаниҳои 3-солаи Panax notoginseng ҷамъоварӣ карда шуданд.
Дар моҳи ноябри соли 2019, растаниҳои сесолаи Panax notoginseng аз саҳро ҷамъоварӣ карда шуда, бо кислотаи оксалат пошида шуданд. Баъзе намунаҳои растаниҳои сесолаи Panax notoginseng, ки бояд мубодилаи моддаҳои физиологӣ ва фаъолияти ферментҳоро чен мекарданд, барои яхкунӣ дар найчаҳо ҷойгир карда шуданд, зуд бо нитрогени моеъ ях карда, сипас дар ҳарорати -80°C ба яхдон интиқол дода шуданд. Баъзе намунаҳои реша, ки барои муайян кардани миқдори Cd ва моддаҳои фаъол дар марҳилаи пухта расидан чен карда мешуданд, бо оби лӯла шуста, дар ҳарорати 105°C барои 30 дақиқа, дар вазни доимӣ дар ҳарорати 75°C хушк карда шуданд ва барои нигоҳдорӣ дар маҳлул майда карда шуданд.
0,2 г намунаи хушки растаниро баркашед, онро дар колбаи Эрленмейер ҷойгир кунед, 8 мл HNO3 ва 2 мл HClO4 илова кунед ва як шабонарӯз пӯшонед. Рӯзи дигар, барои ҳазми электротермикӣ аз як қифчаи каҷ истифода баред, ки дар колбаи Эрленмейер ҷойгир карда шудааст, то он даме ки дуди сафед пайдо шавад ва шарбати ҳозима шаффоф шавад. Пас аз хунук шудан ба ҳарорати хонагӣ, омехта ба колбаи ҳаҷмии 10 мл интиқол дода шуд. Миқдори Cd бо истифода аз спектрометри ҷабби атомӣ (Thermo ICE™ 3300 AAS, ИМА) муайян карда шуд. (GB/T 23739-2009).
0,2 г намунаи хушки растаниро баркашед, онро дар шишаи пластикии 50 мл ҷойгир кунед, 1 мол L-1 HCL-ро ба 10 мл илова кунед, сарпӯшро пӯшед ва барои 15 соат хуб ҷунбонед ва филтр кунед. Бо истифода аз пипетка миқдори зарурии филтратро бо пипетка рехта, онро мувофиқан об кунед ва маҳлули SrCl2-ро илова кунед, то консентратсияи Sr2+-ро ба 1 г L-1 расонед. Миқдори Ca бо истифода аз спектрометри ҷабби атомӣ (Thermo ICE™ 3300 AAS, ИМА) чен карда шуд.
Усули маҷмӯаи истинодии малонидиалдегид (MDA), супероксиддисмутаза (SOD), пероксидаза (POD) ва каталаза (CAT) (DNM-9602, Beijing Prong New Technology Co., Ltd., бақайдгирии маҳсулот), маҷмӯаи андозагирии мувофиқро истифода баред. Рақам: Beijing Pharmacopoeia (дақиқ) 2013 № 2400147).
Тақрибан 0,05 г намунаи нотогинсенги Panax-ро чен кунед ва реагенти антрон-кислотаи сулфатро дар паҳлӯҳои найча илова кунед. Барои омехта кардани моеъ, найчаро барои 2-3 сония ҷунбонед. Барои пайдо шудани ранг, найчаро барои 15 дақиқа дар болои рафи найча гузоред. Миқдори шакари ҳалшаванда бо истифода аз спектрофотометрияи ултрабунафш-намоён (UV-5800, Shanghai Yuanxi Instrument Co., Ltd., Чин) дар дарозии мавҷи 620 нм муайян карда шуд.
0,5 г намунаи тару тозаи Panax notoginseng-ро баркашед, онро бо 5 мл оби тозашуда ба шакли гомогенат майда кунед ва сипас дар ҳаҷми 10,000 г барои 10 дақиқа сентрифуга кунед. Қисми болоии об то ҳаҷми муайян ҳал карда шуд. Усули Coomassie Brilliant Blue истифода шуд. Миқдори сафедаи ҳалшаванда бо истифода аз спектрофотометрияи ултрабунафш-намоён (UV-5800, Shanghai Yuanxi Instrument Co., Ltd., Чин) дар дарозии мавҷи 595 нм чен карда шуд ва дар асоси каҷи стандартии албумини зардоби гов ҳисоб карда шуд.
0,5 г намунаи тару тозаро баркашед, 5 мл кислотаи 10%-и сирко илова кунед, то гомогенат майда кунед, филтр кунед ва то ҳаҷми доимӣ об кунед. Усули таҳияи ранг бо маҳлули нингидрин истифода шуд. Миқдори аминокислотаҳои озод бо истифода аз спектрофотометрияи ултрабунафш-намоён (UV-5800, Shanghai Yuanxi Instrument Co., Ltd., Чин) дар 570 нм муайян карда шуд ва дар асоси каҷи стандартии лейцин ҳисоб карда шуд28.
0,5 г намунаи тару тозаро баркашед, 5 мл маҳлули 3%-и кислотаи сулфосалицилро илова кунед, дар ваннаи обӣ гарм кунед ва барои 10 дақиқа ҷунбонед. Пас аз хунуккунӣ, маҳлул филтр карда шуд ва ба ҳаҷми доимӣ расонда шуд. Усули колориметрӣ бо нингидрини кислота истифода шуд. Миқдори пролин бо истифода аз спектрофотометрияи ултрабунафш-намоён (UV-5800, Shanghai Yuanxi Instrument Co., Ltd., Чин) дар дарозии мавҷи 520 нм муайян карда шуд ва дар асоси каҷи стандартии пролин ҳисоб карда шуд29.
Миқдори сапонин бо истифода аз хроматографияи моеъи баландсифат бо истинод ба Фармакопеяи Ҷумҳурии Мардумии Чин (нашри соли 2015) муайян карда шуд. Принсипи асосии хроматографияи моеъи баландсифат истифодаи моеъи фишори баланд ҳамчун фазаи мобилӣ ва татбиқи технологияи ҷудокунии зарраҳои ултрамайини хроматографияи сутуни баландсифат ба фазаи статсионарӣ мебошад. Усули амалиёт чунин аст:
Санҷиши шароити HPLC ва мувофиқати система (Ҷадвали 1): Гели силикатии пайвастшудаи октадецилсиланро ҳамчун пуркунанда, ацетонитрилро ҳамчун фазаи мобилии А ва обро ҳамчун фазаи мобилии В истифода баред. Элюсияи градиентиро, ки дар ҷадвали зер нишон дода шудааст, иҷро кунед. Дарозии мавҷи ошкоркунӣ 203 нм аст. Мувофиқи қуллаи R1 аз сапонинҳои умумии Panax notoginseng, шумораи лавҳаҳои назариявӣ бояд ҳадди аққал 4000 бошад.
Тайёр кардани маҳлули стандартӣ: Гинзенозид Rg1, гинзенозид Rb1 ва нотогинсенозид R1-ро бодиққат баркашед ва метанолро илова кунед, то омехтаеро омода кунед, ки дар он 0,4 мг гинзенозид Rg1, 0,4 мг гинзенозид Rb1 ва 0,1 мг нотогинсенозид R1 барои 1 мл маҳлул мавҷуд аст.
Тайёр кардани маҳлули озмоишӣ: 0,6 г хокаи женьшени Панаксро вазн кунед ва 50 мл метанол илова кунед. Маҳлули омехта вазн карда шуд (W1) ва шабона гузошта шуд. Сипас маҳлули омехта дар ваннаи обӣ дар ҳарорати 80°C барои 2 соат оҳиста ҷӯшонида шуд. Пас аз хунуккунӣ, маҳлули омехтаро вазн кунед ва метаноли тайёршударо ба массаи аввалини W1 илова кунед. Сипас хуб ҷунбонед ва филтр кунед. Филтрат барои таҳлил гузошта мешавад.
Барои муайян кардани миқдори сапонин 24, 10 мкл маҳлули стандартӣ ва 10 мкл филтратро бодиққат ҷамъ кунед ва онҳоро ба хроматографи моеъи баландсифат (Thermo HPLC-ultimate 3000, Seymour Fisher Technology Co., Ltd.) ворид кунед.
Каҷхати стандартӣ: андозагирии маҳлули омехтаи стандартии Rg1, Rb1 ва R1. Шароити хроматография бо шартҳои дар боло зикршуда якхела аст. Каҷхати стандартиро бо роҳи кашидани майдони қуллаи ченшуда дар меҳвари y ва консентратсияи сапонин дар маҳлули стандартӣ дар меҳвари x ҳисоб кунед. Консентратсияи сапонинро бо иваз кардани майдони қуллаи ченшудаи намуна ба каҷхати стандартӣ ҳисоб кардан мумкин аст.
0,1 г намунаи P. notogensings-ро кашед ва 50 мл маҳлули 70% CH3OH илова кунед. Истихроҷи ултрасадо барои 2 соат анҷом дода шуд ва баъдан бо суръати 4000 чархзанӣ барои 10 дақиқа сентрифуга карда шуд. 1 мл маҳлули болоии обро гирифта, онро 12 маротиба об кунед. Миқдори флавоноидҳо бо истифода аз спектрофотометрияи намоёни ултрабунафш (UV-5800, Shanghai Yuanxi Instrument Co., Ltd., Чин) дар дарозии мавҷи 249 нм муайян карда шуд. Кверсетин яке аз моддаҳои маъмули стандартӣ мебошад8.
Маълумотҳо бо истифода аз нармафзори Excel 2010 тартиб дода шуданд. Барои таҳлили дисперсия дар маълумот нармафзори омории SPSS 20 истифода шуд. Тасвирҳо бо истифода аз Origin Pro 9.1 кашида шуданд. Арзишҳои омории ҳисобшуда миёна ± SD-ро дар бар мегиранд. Изҳороти аҳамияти оморӣ бар асоси P < 0.05 тартиб дода шудаанд.
Дар ҳамон консентратсияи кислотаи оксалат, ки ба баргҳо пошида мешуд, миқдори Ca дар решаҳои Panax notoginseng бо афзоиши миқдори оҳак ба таври назаррас афзоиш ёфт (Ҷадвали 2). Дар муқоиса бо набудани оҳак, миқдори Ca ҳангоми илова кардани 3750 кг/соат/м2 оҳак бе пошидани кислотаи оксалат 212% афзоиш ёфт. Барои ҳамон миқдори оҳак, миқдори Ca бо афзоиши консентратсияи пошидани кислотаи оксалат каме афзоиш ёфт.
Миқдори Cd дар решаҳо аз 0,22 то 0,70 мг кг-1 аст. Дар ҳамон консентратсияи пошидани кислотаи оксалат, бо афзоиши миқдори оҳаки иловашуда, миқдори Cd 2250 кг/соат ба таври назаррас коҳиш меёбад. Дар муқоиса бо гурӯҳи назоратӣ, миқдори Cd дар решаҳо пас аз пошидани 2250 кг hm-2 оҳаки ва 0,1 мол л-1 кислотаи оксалат 68,57% коҳиш ёфт. Ҳангоми пошидани оҳаки беоҳак ва 750 кг/соат, миқдори Cd дар решаҳои Panax notoginseng бо афзоиши консентратсияи пошидани кислотаи оксалат ба таври назаррас коҳиш ёфт. Вақте ки оҳаки 2250 кг/м2 ва оҳаки 3750 кг/м2 пошида шуд, миқдори Cd дар реша аввал кам шуд ва сипас бо афзоиши консентратсияи кислотаи оксалат зиёд шуд. Илова бар ин, таҳлили дуҷониба нишон дод, ки оҳак ба миқдори Ca дар решаҳои Panax notoginseng (F = 82.84**), оҳак ба миқдори Cd дар решаҳои Panax notoginseng (F = 74.99**) ва кислотаи оксалат (F=7.72*) таъсири назаррас дошт.
Бо афзоиши миқдори оҳак ва консентратсияи кислотаи оксалат, миқдори MDA ба таври назаррас коҳиш ёфт. Дар миқдори MDA дар решаҳои Panax notoginseng бе илова кардани оҳак ва бо илова кардани 3750 кг/м2 оҳак фарқияти назаррасе ба назар нарасид. Дар суръати истифодаи 750 кг/соат/м2 ва 2250 кг/соат/м2, миқдори оҳак дар коркарди пошидани кислотаи оксалат 0,2 мол/л мутаносибан 58,38% ва 40,21% коҳиш ёфт, дар муқоиса бо коркарди пошидани кислотаи оксалат. Пасттарин миқдори MDA (7,57 нмол г-1) ҳангоми пошидани оҳак 750 кг hm-2 ва кислотаи оксалат 0,2 мол л-1 мушоҳида шуд (Расми 1).
Таъсири пошидани баргҳо бо кислотаи оксалатӣ ба миқдори малонидиальдегид дар решаҳои Panax notoginseng таҳти фишори кадмий. Эзоҳ: Шарҳ дар расм консентратсияи кислотаи оксалатро ҳангоми пошидан (мол L-1) нишон медиҳад, ҳарфҳои хурди гуногун фарқиятҳои назаррасро байни коркарди як истифодаи оҳак нишон медиҳанд. рақам (P < 0.05). Дар зер низ ҳамин тавр аст.
Ба истиснои истифодаи 3750 кг/соат оҳаки, дар фаъолияти SOD дар решаҳои Panax notoginseng фарқияти назаррасе ба назар нарасид. Ҳангоми илова кардани 0, 750 ва 2250 кг/соат/м2 оҳаки, фаъолияти SOD ҳангоми коркард бо пошидани кислотаи оксалатӣ дар консентратсияи 0,2 мол/л нисбат ба бе истифодаи кислотаи оксалатӣ ба таври назаррас баландтар буд ва мутаносибан 177,89%, 61,62% ва 45,08% афзоиш ёфт. Фаъолияти SOD дар решаҳо (598,18 U g-1) дар сурати набудани истифодаи оҳак ва ҳангоми коркард бо пошидани кислотаи оксалатӣ дар консентратсияи 0,2 мол/л баландтарин буд. Вақте ки кислотаи оксалатӣ дар ҳамон консентратсия ё 0,1 мол L-1 пошида мешуд, фаъолияти SOD бо афзоиши миқдори иловашудаи оҳаки зиёд мешуд. Пас аз пошидани 0,2 мол/л кислотаи оксалатӣ, фаъолияти SOD ба таври назаррас коҳиш ёфт (Расми 2).
Таъсири пошидани баргҳо бо кислотаи оксалат ба фаъолияти супероксиддисмутаза, пероксидаза ва каталаза дар решаҳои Panax notoginseng таҳти фишори кадмий
Мисли фаъолияти SOD дар решаҳо, фаъолияти POD дар решаҳое, ки бе оҳак коркард шуда, бо 0,2 мол L-1 кислотаи оксалат пошида шуда буданд, баландтарин буд (63,33 мкмол г-1), ки 148,35% аз гурӯҳи назоратӣ (25,50 мкмол г-1) баландтар аст. Бо афзоиши консентратсияи пошидани кислотаи оксалат ва коркарди оҳак бо 3750 кг/м2, фаъолияти POD аввал афзоиш ёфт ва сипас коҳиш ёфт. Дар муқоиса бо коркард бо 0,1 мол L-1 кислотаи оксалат, фаъолияти POD ҳангоми коркард бо 0,2 мол L-1 кислотаи оксалат 36,31% коҳиш ёфт (Расми 2).
Ба истиснои пошидани 0,2 мол/л кислотаи оксалат ва илова кардани 2250 кг/соат/м2 ё 3750 кг/соат/м2 оҳаки, фаъолияти CAT нисбат ба назорати хеле баландтар буд. Ҳангоми пошидани 0,1 мол/л кислотаи оксалат ва илова кардани 0,2250 кг/м2 ё 3750 кг/соат/м2 оҳаки, фаъолияти CAT дар муқоиса бо коркард бе пошидани кислотаи оксалат мутаносибан 276,08%, 276,69% ​​ва 33,05% афзоиш ёфт. Фаъолияти CAT дар решаҳо дар коркарди бе оҳак ва дар коркарди 0,2 мол/л кислотаи оксалат баландтарин (803,52 мкмол/г) буд. Фаъолияти CAT ҳангоми коркард бо 3750 кг/соат/м2 оҳаки ва 0,2 мол/л кислотаи оксалат пасттарин (172,88 мкмол/г) буд (Расми 2).
Таҳлили дуҷониба нишон дод, ки фаъолияти CAT ва фаъолияти MDA-и решаҳои Panax notoginseng бо миқдори кислотаи оксалат ё оҳак пошидашуда ва ду коркард алоқамандии назаррас доштанд (Ҷадвали 3). Фаъолияти SOD дар решаҳо бо коркарди оҳак ва кислотаи оксалат ё консентратсияи пошидани кислотаи оксалат алоқамандии назаррас дошт. Фаъолияти POD реша аз миқдори оҳак ё коркарди оҳак ва кислотаи оксалат вобастагии назаррас дошт.
Миқдори қандҳои ҳалшаванда дар решаҳо бо афзоиши миқдори пошидани оҳак ва консентратсияи пошидани кислотаи оксалат коҳиш ёфт. Дар миқдори қандҳои ҳалшаванда дар решаҳои Panax notoginseng бе пошидани оҳак ва ҳангоми пошидани 750 кг/соат/м2 оҳак фарқияти назаррасе вуҷуд надошт. Ҳангоми пошидани 2250 кг/м2 оҳак, миқдори қанди ҳалшаванда ҳангоми коркард бо 0,2 мол/л кислотаи оксалат нисбат ба ҳангоми коркард бе пошидани кислотаи оксалат ба таври назаррас баландтар буд ва 22,81% афзоиш ёфт. Вақте ки 3750 кг соат/м2 оҳак истифода шуд, миқдори қанди ҳалшаванда ҳангоми афзоиши консентратсияи кислотаи оксалат ба таври назаррас коҳиш ёфт. Миқдори қанди ҳалшаванда ҳангоми коркард бо 0,2 мол L-1 кислотаи оксалат дар муқоиса бо 38,77% бе пошидани кислотаи оксалат коҳиш ёфт. Илова бар ин, коркарди пошидани кислотаи оксалат бо миқдори 0,2 мол·L-1 дорои пасттарин миқдори шакари ҳалшаванда буд, ки 205,80 мг·г-1 буд (Расми 3).
Таъсири пошидани баргҳо бо кислотаи оксалат ба миқдори қанди умумии ҳалшаванда ва сафедаи ҳалшаванда дар решаҳои нотогинсенги Panax таҳти стресси кадмий
Миқдори сафедаи ҳалшаванда дар решаҳо бо афзоиши миқдори пошидани оҳак ва коркарди пошидани кислотаи оксалат коҳиш ёфт. Бе илова кардани оҳак, миқдори сафедаи ҳалшаванда ҳангоми коркард бо пошидани кислотаи оксалат дар консентратсияи 0,2 мол L-1 нисбат ба гурӯҳи назорат ба таври назаррас 16,20% коҳиш ёфт. Ҳангоми истифодаи 750 кг/соат оҳак дар миқдори сафедаи ҳалшавандаи решаҳои Panax notoginseng фарқиятҳои назаррас вуҷуд надоштанд. Дар шароити истифодаи 2250 кг/соат/м оҳак, миқдори сафедаи ҳалшавандаи 0,2 мол/л коркарди пошидани кислотаи оксалат нисбат ба коркарди пошидани кислотаи ғайриоксалатӣ (35,11%) ба таври назаррас баландтар буд. Ҳангоми истифодаи 3750 кг·соат/м2 оҳак, миқдори сафедаи ҳалшаванда бо афзоиши консентратсияи пошидани кислотаи оксалат ба таври назаррас коҳиш ёфт ва миқдори сафедаи ҳалшавандаи пасттарин (269,84 мкг·г-1) ҳангоми коркарди пошидани кислотаи оксалат 0,2 мол·л-1 буд (Расми 3).
Дар таркиби аминокислотаҳои озод дар решаи Panax notoginseng ҳангоми набудани пошидани оҳак фарқияти назаррасе ба назар нарасид. Ҳангоми афзоиши консентратсияи кислотаи оксалат ва илова кардани 750 кг/соат/м2 оҳак, миқдори аминокислотаҳои озод аввал кам ва сипас зиёд мешуд. Дар муқоиса бо коркарди бе пошидани кислотаи оксалат, миқдори аминокислотаҳои озод ҳангоми пошидани 2250 кг hm-2 оҳак ва 0,2 мол л-1 кислотаи оксалат ба таври назаррас 33,58% афзоиш ёфт. Миқдори аминокислотаҳои озод бо афзоиши консентратсияи пошидани кислотаи оксалат ва илова кардани 3750 кг/м2 оҳак ба таври назаррас коҳиш ёфт. Миқдори аминокислотаҳои озод дар коркарди пошидани кислотаи оксалат бо 0,2 мол л-1 дар муқоиса бо коркарди пошидани кислотаи оксалат 49,76% кам шуд. Миқдори аминокислотаҳои озод бидуни пошидани кислотаи оксалат баландтарин буд ва 2,09 мг г-1-ро ташкил дод. Табобати пошидани кислотаи оксалат бо миқдори 0,2 мол/л пасттарин миқдори аминокислотаи озодро (1,05 мг/г) дошт (Расми 4).
Таъсири пошидани баргҳо бо кислотаи оксалат ба миқдори аминокислотаҳои озод ва пролин дар решаҳои Panax notoginseng дар шароити стресси кадмий
Миқдори пролин дар решаҳо бо афзоиши миқдори оҳак ва миқдори пошидани кислотаи оксалат коҳиш ёфт. Ҳангоми пошидани оҳак дар миқдори пролини решаи женьшени Панакс фарқияти назаррасе вуҷуд надошт. Ҳангоми зиёд шудани консентратсияи кислотаи оксалат ва истифодаи 750 ё 2250 кг/м2 оҳак, миқдори пролин аввал кам ва сипас зиёд шуд. Миқдори пролин дар коркарди пошидани кислотаи оксалат 0,2 мол L-1 нисбат ба коркарди пошидани кислотаи оксалат 0,1 мол L-1 ба таври назаррас баландтар буд ва мутаносибан 19,52% ва 44,33% афзоиш ёфт. Вақте ки 3750 кг/м2 оҳак илова карда шуд, миқдори пролин бо зиёд шудани консентратсияи кислотаи оксалат ба таври назаррас коҳиш ёфт. Пас аз пошидани кислотаи оксалат 0,2 мол L-1, миқдори пролин дар муқоиса бо миқдори бе пошидани кислотаи оксалат 54,68% коҳиш ёфт. Миқдори пасттарини пролин ҳангоми коркард бо 0,2 мол/л кислотаи оксалат ба 11,37 мкг/г баробар буд (Расми 4).
Миқдори умумии сапонин дар Panax notoginseng Rg1>Rb1>R1 аст. Дар миқдори се сапонин бо афзоиши консентратсияи пошидани кислотаи оксалат ва консентратсия бе истифодаи оҳак фарқияти назаррасе мушоҳида нашуд (Ҷадвали 4).
Миқдори R1 пас аз пошидани 0,2 мол L-1 кислотаи оксалатӣ нисбат ба бе пошидани кислотаи оксалатӣ ва истифодаи миқдори оҳак ба андозаи 750 ё 3750 кг/м2 хеле пасттар буд. Дар консентратсияи кислотаи оксалатӣ бо пошидани 0 ё 0,1 мол/л, бо афзоиши миқдори иловашудаи оҳак дар миқдори R1 фарқияти назаррасе ба назар нарасид. Дар консентратсияи пошидани 0,2 мол/л кислотаи оксалатӣ, миқдори R1 дар 3750 кг/соат/м2 оҳак ба таври назаррас аз 43,84% бе илова кардани оҳак камтар буд (Ҷадвали 4).
Ҳангоми афзоиши консентратсияи кислотаи оксалат ва илова кардани 750 кг/м2 оҳак, миқдори Rg1 аввал зиёд ва сипас кам мешуд. Дар суръати истифодаи оҳак, ки 2250 ва 3750 кг/соат буд, миқдори Rg1 бо афзоиши консентратсияи пошидани кислотаи оксалат коҳиш меёфт. Дар ҳамон консентратсияи кислотаи оксалат, бо афзоиши миқдори оҳак, миқдори Rg1 аввал зиёд ва сипас кам мешавад. Дар муқоиса бо гурӯҳи назоратӣ, ба истиснои миқдори Rg1 дар се консентратсияи кислотаи оксалат ва коркарди оҳак бо 750 кг/м2, ки аз назорати баландтар буд, миқдори Rg1 дар решаҳои Panax notoginseng дар дигар коркардҳо нисбат ба назорати пасттар буд. Миқдори максималии Rg1 ҳангоми пошидани 750 кг/соат/м2 оҳак ва 0,1 мол/л кислотаи оксалат буд, ки 11,54% аз назорати назорат баландтар буд (Ҷадвали 4).
Вақте ки консентратсияи пошидани кислотаи оксалат ва миқдори оҳаки истифодашуда бо суръати ҷараёни 2250 кг/соат афзоиш ёфт, миқдори Rb1 аввал зиёд ва сипас кам шуд. Пас аз пошидани 0,1 мол L-1 кислотаи оксалат, миқдори Rb1 ба арзиши максималии 3,46% расид, ки нисбат ба бе пошидани кислотаи оксалат 74,75% баландтар буд. Барои дигар коркардҳои оҳак, байни консентратсияҳои гуногуни пошидани кислотаи оксалат фарқияти назаррас вуҷуд надошт. Пас аз пошидани 0,1 ва 0,2 мол L-1 кислотаи оксалат, бо афзоиши миқдори оҳак, миқдори Rb1 аввал кам ва сипас кам шуд (Ҷадвали 4).
Дар ҳамон консентратсияи пошидан бо кислотаи оксалат, бо зиёд шудани миқдори оҳак, миқдори флавоноидҳо аввал зиёд ва сипас кам мешуд. Ҳангоми пошидани консентратсияҳои гуногуни кислотаи оксалат бе оҳак ва 3750 кг/м2 оҳак фарқияти назаррас дар миқдори флавоноидҳо мушоҳида нашуд. Ҳангоми илова кардани 750 ва 2250 кг/м2 оҳак, бо зиёд шудани консентратсияи кислотаи оксалат, миқдори флавоноидҳо аввал зиёд ва сипас кам мешуд. Ҳангоми истифодаи 750 кг/м2 ва пошидани кислотаи оксалат бо консентратсияи 0,1 мол/л, миқдори флавоноидҳо ҳадди аксар буд - 4,38 мг/г, ки 18,38% аз ҳангоми илова кардани ҳамон миқдори оҳак зиёдтар аст ва ба пошидани кислотаи оксалат ниёз набуд. Миқдори флавоноидҳо ҳангоми коркард бо пошидани 0,1 мол L-1 кислотаи оксалатӣ дар муқоиса бо коркарди бе кислотаи оксалатӣ ва коркард бо оҳак бо миқдори 2250 кг/м2 21,74% афзоиш ёфт (Расми 5).
Таъсири пошидани оксалат ба баргҳо ба миқдори флавоноидҳо дар решаи Panax notoginseng таҳти фишори кадмий
Таҳлили дуҷониба нишон дод, ки миқдори қанди ҳалшавандаи решаҳои Panax notoginseng аз миқдори оҳак, ки истифода шудааст ва консентратсияи кислотаи оксалат пошида шудааст, ба таври назаррас вобаста аст. Миқдори сафедаи ҳалшаванда дар решаҳо бо миқдори оҳак ва кислотаи оксалат ба таври назаррас алоқаманд буд. Миқдори аминокислотаҳои озод ва пролин дар решаҳо бо миқдори оҳак, консентратсияи пошида шудани кислотаи оксалат, оҳак ва кислотаи оксалат ба таври назаррас алоқаманд буд (Ҷадвали 5).
Миқдори R1 дар решаҳои нотогинсенги Panax аз консентратсияи кислотаи оксалатӣ, миқдори оҳак, оҳак ва кислотаи оксалатӣ, ки истифода мешуданд, вобастагии калон дошт. Миқдори флавоноидҳо аз консентратсияи пошидани кислотаи оксалатӣ ва миқдори оҳаки иловашуда вобастагии калон дошт.
Барои коҳиш додани сатҳи кадмий дар растаниҳо бо роҳи мустаҳкам кардани кадмий дар хок, бисёр тағйиротҳо истифода шудаанд, ба монанди оҳак ва кислотаи оксалат30. Оҳак ба таври васеъ ҳамчун иловаи хок барои коҳиш додани сатҳи кадмий дар зироатҳо истифода мешавад31. Лян ва ҳамкорон32 гузориш доданд, ки кислотаи оксалатро инчунин барои барқарор кардани хоки олуда бо металлҳои вазнин истифода бурдан мумкин аст. Пас аз илова кардани консентратсияҳои гуногуни кислотаи оксалат ба хоки олуда, миқдори моддаҳои органикии хок афзоиш ёфт, қобилияти мубодилаи катион коҳиш ёфт ва рН33 афзоиш ёфт. Кислотаи оксалат инчунин метавонад бо ионҳои металлӣ дар хок реаксия кунад. Дар шароити стресси Cd, миқдори Cd дар Panax notoginseng дар муқоиса бо гурӯҳи назоратӣ ба таври назаррас афзоиш ёфт. Аммо, агар оҳак истифода шавад, он ба таври назаррас коҳиш меёбад. Вақте ки дар ин таҳқиқот 750 кг/соат/м оҳак истифода шуд, миқдори Cd дар решаҳо ба стандарти миллӣ расид (ҳадди Cd Cd≤0.5 мг/кг аст, AQSIQ, GB/T 19086-200834) ва таъсир хуб буд. Беҳтарин таъсир бо илова кардани 2250 кг/м2 оҳак ба даст оварда мешавад. Илова кардани оҳак шумораи зиёди ҷойҳои рақобатпазирро барои Ca2+ ва Cd2+ дар хок эҷод мекунад ва илова кардани кислотаи оксалат миқдори Cd-ро дар решаҳои Panax notoginseng коҳиш медиҳад. Пас аз омехта кардани оҳак ва кислотаи оксалат, миқдори Cd-и решаи Panax ginseng ба таври назаррас коҳиш ёфта, ба стандарти миллӣ мерасад. Ca2+ дар хок тавассути раванди ҷараёни масса ба сатҳи реша адсорбсия мешавад ва метавонад тавассути каналҳои калсий (каналҳои Ca2+), насосҳои калсий (Ca2+-AT-Pase) ва антипортерҳои Ca2+/H+ ба ҳуҷайраҳои реша ҷаббида шавад ва сипас ба таври уфуқӣ интиқол дода шавад. ба решаҳо. Xylem23. Байни миқдори Ca ва Cd дар решаҳо коррелятсияи назарраси манфӣ ба амал омад (P <0.05). Миқдори Cd бо афзоиши миқдори Ca коҳиш ёфт, ки бо идеяи антагонизм байни Ca ва Cd мувофиқ аст. ANOVA нишон дод, ки миқдори оҳак ба миқдори Ca дар решаи Panax notoginseng таъсири назаррас дошт. Понграк ва ҳамкоронаш 35 гузориш доданд, ки Cd дар кристаллҳои оксалати калсий ба оксалат пайваст мешавад ва бо Ca рақобат мекунад. Аммо, таъсири танзимкунандаи кислотаи оксалат ба Ca ночиз буд. Ин нишон медиҳад, ки боришоти оксалати калсий аз кислотаи оксалат ва Ca2+ боришоти оддӣ нест ва раванди боришоти якҷоя метавонад тавассути якчанд роҳҳои мубодилаи моддаҳо назорат карда шавад.
Дар зери стресси кадмий, миқдори зиёди намудҳои реактивии оксиген (ROS) дар растаниҳо ташаккул меёбад, ки ба сохтори мембранаҳои ҳуҷайра зарар мерасонад36. Миқдори малониалдегид (MDA) метавонад ҳамчун нишондиҳанда барои арзёбии сатҳи ROS ва дараҷаи осеб ба мембранаи плазмавии растаниҳо37 истифода шавад. Системаи антиоксидантӣ як механизми муҳими муҳофизатӣ барои тоза кардани намудҳои реактивии оксиген38 мебошад. Фаъолияти ферментҳои антиоксидантӣ (аз ҷумла POD, SOD ва CAT) одатан аз ҷониби стресси кадмий тағйир меёбад. Натиҷаҳо нишон доданд, ки миқдори MDA бо консентратсияи Cd мусбат алоқаманд аст, ки нишон медиҳад, ки дараҷаи пероксидшавии липидҳои мембранаи растанӣ бо афзоиши консентратсияи Cd амиқтар мешавад37. Ин бо натиҷаҳои таҳқиқоти Оуянг ва ҳамкорон39 мувофиқ аст. Ин таҳқиқот нишон медиҳад, ки миқдори MDA аз оҳак, кислотаи оксалат, оҳак ва кислотаи оксалат ба таври назаррас таъсир мерасонад. Пас аз небулайзер кардани 0,1 мол L-1 кислотаи оксалатӣ, миқдори MDA дар Panax нотогинсенг коҳиш ёфт, ки нишон медиҳад, ки кислотаи оксалатӣ метавонад биодастрасии сатҳи Cd ва ROS-ро дар Panax нотогинсенг коҳиш диҳад. Системаи ферментҳои антиоксидантӣ ҷоест, ки вазифаи детоксикатсиякунии растанӣ ба амал меояд. SOD O2-ро, ки дар ҳуҷайраҳои растанӣ мавҷуд аст, хориҷ мекунад ва O2-и ғайритоксикӣ ва H2O2-и камтоксикӣ истеҳсол мекунад. POD ва CAT H2O2-ро аз бофтаҳои растанӣ хориҷ мекунанд ва таҷзияи H2O2-ро ба H2O катализ мекунанд. Бар асоси таҳлили протеоми iTRAQ, муайян карда шуд, ки сатҳи ифодаи сафедаҳои SOD ва PAL пас аз истифодаи оҳак дар зери стресси Cd40 коҳиш ёфта, сатҳи ифодаи POD афзоиш ёфтааст. Миқдори кислотаи оксалатӣ ва оҳак ба фаъолияти CAT, SOD ва POD дар решаи Panax нотогинсенг ба таври назаррас таъсир расонд. Коркарди пошидан бо кислотаи оксалатӣ бо 0,1 мол L-1 фаъолияти SOD ва CAT-ро ба таври назаррас афзоиш дод, аммо таъсири танзимкунанда ба фаъолияти POD возеҳ набуд. Ин нишон медиҳад, ки кислотаи оксалатӣ таҷзияи ROS-ро дар зери стресси Cd суръат мебахшад ва асосан хориҷ кардани H2O2-ро бо танзими фаъолияти CAT ба анҷом мерасонад, ки ба натиҷаҳои таҳқиқоти Guo et al.41 дар бораи ферментҳои антиоксидантии Pseudospermum sibiricum. Kos. монанд аст). Таъсири илова кардани 750 кг/соат/м2 оҳак ба фаъолияти ферментҳои системаи антиоксидантӣ ва миқдори малониалдегид ба таъсири пошидани кислотаи оксалатӣ монанд аст. Натиҷаҳо нишон доданд, ки коркарди пошидан бо кислотаи оксалатӣ метавонад фаъолияти SOD ва CAT-ро дар Panax notoginseng самараноктар афзоиш диҳад ва муқовимати стрессии Panax notoginseng-ро афзоиш диҳад. Фаъолияти SOD ва POD бо коркарди 0,2 мол L-1 кислотаи оксалатӣ ва 3750 кг hm-2 оҳаки кам карда шуд, ки ин нишон медиҳад, ки пошидани аз ҳад зиёди консентратсияи баланди кислотаи оксалатӣ ва Ca2+ метавонад боиси стресси растанӣ гардад, ки бо таҳқиқоти Луо ва ғайра мувофиқ аст. 42-ро интизор шавед.